Trong các sinh vật nhân chuẩn không quang hợp như động vật, nấm và động vật nguyên sinh, cũng như nhóm vi khuẩn Alphaproteobacteria, nó được sản xuất bởi enzyme ALA synthase, từ glycine và succ502 CoA. Phản ứng này được gọi là con đường Shemin, xảy ra trong ty thể.[14]

Trong thực vật, tảo, vi khuẩn (trừ nhóm α-proteobacteria) và vi khuẩn cổ, nó được sản xuất từ axit glutamic thông qua glutamyl-tRNA và glutamate-1-semialdehyd. Các enzyme tham gia vào con đường này là glutamyl-tRNA synthetase, glutamyl-tRNA reductase và glutamate-1-semialdehyd 2.1-aminomutase. Con đường này được gọi là con đường C5 hoặc Beale.[15][16] Trong hầu hết các loài có chứa plastid, glutamyl-tRNA được mã hóa bởi một gen plastid, và phiên mã, cũng như các bước sau của con đường C5, diễn ra trong plastid.[17]